《表2 real-time PCR扩增引物》

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分别取各组组织约0.5 g放入EP管中，按照Trizol总RNA提取试剂盒说明书提取组织内RNA，取1μL提取液于蛋白分析仪测定含量及纯度；按照反转录试剂盒说明书所述配置总反应为10μL反转录体系，置于PCR以上按37℃15 min，98℃5 min，4℃30 min程序进行反转录，反应后将cDNA定量至100 ng/μL。随后，配置总体积为20μL的real-time PCR反应体系：SYBR qPCR Mix 10μL，上游/下游引物各1μL，DEPC水7μL，cDNA1μL；反应条件如下：95℃3 min预变性，95℃10s、95℃5 s、60℃30 s，共40个循环并于60℃下充分延伸10min，real-time PCR引物见表2，反应结束后导出并整理数据。