《表2 Real-Time PCR所用引物》

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《整合mRNA-miRNA转录组比较ITE对人鼠胶质瘤细胞作用的异同》

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注:*:未做效率测定，为理论效率

按上述培养条件培养U87MG和GL261待细胞生长至60%左右融合度时对细胞进行ITE（10 nmol/L和0.1 nnmol/L)和DMSO处理18 h，提取总RNA （总RNA急速抽提试剂盒220010）和micro RNA （mi Rcute mi RNA提取分离试剂盒DP501）后分别进行m RNA反转录（Prime Script TM RT Master Mix (Perfect Real Time）RR026A）和micro RNA反转录（mi Rcute增强型mi RNAc DNA第一链合成试剂盒KR211）。将m RNA反转录所得c DNA梯度稀释用于后续引物效率测定（表2），100倍稀释用于定量分析。micro RNA引物购自天根，未进行效率测定。分别按说明书条件进行CDK4，PRMT5，CD44 （TB Green TM Premix Ex Taq TM II RR820A）和has-mi R-21-3p （mi Rcute增强型mi R-NA荧光定量检测试剂盒FP411）相对定量，分别以β-actin和U6为内参。