《表1 Real-Time PCR所用引物》

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《有氧运动干预父系C57BL/6小鼠对雄性子代IGF-1表达及其甲基化的影响》

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Trizol法提取各组动物肝脏组织中的总RNA后，以总RNA为模板，用First-Strand Synthesis System for RT-PCR试剂盒（TaKaRa）来合成cDNA第一链，按1∶9的比例用H2O稀释合成的cDNA，所得稀释cDNA为Real-time PCR模板。Real-time PCR反应按照SYBR Green Real-time PCR Master Mix试剂盒的说明操作（Roche）。总量25μl的反应体系为：Supermix 12.5μl，5’Primer 0.5μl，3’Primer 0.5μl，cDNA 0.5μl，ddH2O 11μl。IGF-1反应条件设定为：94°C高温变性2 min；然后以94°C 1 min，55°C 30 s，72°C 30s，共40个循环。所用引物由上海生工生物技术有限公司合成，GAPDH为内参（见表1）。