《表1 Real-time PCR所用引物序列》

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《异甘草素通过Smad3/Arid2-IR/NF-κB轴改善顺铂诱导的急性肾损伤小鼠炎症反应》

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取各组左肾皮质25 mg，用灭菌处理的眼科剪在提前预冷的裂解液RZ中剪碎至无肉眼可见颗粒，按照RNA simple Total RNA Kit试剂盒说明书操作从肾中提取肾组织总RNA，最后加入30μL Nuclease-Free Water混匀，Thermo Fisher NANODROP 2000分光分度计上测RNA浓度。制备逆转录反应体系，按照Go ScriptTMreverse Transcription System试剂盒推荐比例配置:4μL5×Reaction Buffer，1μL PCR Nucleotide Mix（核苷酸混合物），1μL Go ScriptTMReverse Transcriptase（逆转录酶），1μL MgCl2（终浓度2.5 mmol/L，逆转录酶活性增强剂），8μL Nuclease-Free Water，吹打混匀。将5μL cDNA加入逆转录体系，混匀并离心后逆转录程序如下:25℃5 min，4℃1 h，70℃15 min；逆转录完毕加入80μL Nuclease-Free Water，-20℃保存备用。在LightCycler480 II上机检测Arid2-IR、IL-1β和IL-6的表达量，上机结果分析采用2-ΔΔCt进行分析，引物序列如表1，检测到的基因相对水平以GAPDH正常化。