《表1 引物序列:沙葱总黄酮水洗组分的体外抗炎活性》

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《沙葱总黄酮水洗组分的体外抗炎活性》


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注:iNOS.诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase);MyD88.髓样分化蛋白88(myeloid differential protein 88);NF-κB.核因子κB(nuclear factorκB)。

实验分组同1.3.4节,各质量浓度沙葱总黄酮水洗组分预处理细胞1 h后,继续与LPS共同处理4 h。根据总RNA小量制备试剂盒说明书对收集的细胞进行细胞内总RNA的提取,对所获得的RNA溶液进行纯度及质量浓度的检测。应用反转录试剂盒将提取的RNA反转录为cDNA,采用10?μL反转录体系,反转录条件为:37℃、15 min;85℃、5 s。以β-actin为内参基因,按扩增试剂盒说明书对待测基因的mRNA表达量进行检测,反应条件为:95℃、30 s;95℃、5 s,60℃、20 s,40个循环;95℃15 s;60℃20 s。采用2-ΔΔCt法计算待测基因的相对表达量,ΔΔCt=(Ct目的基因-Ctβ-actin)实验组-(Ct目的基因-Ctβ-actin)空白对照组。引物信息见表1[13-15]。