《表1 引物序列:野生蒙古口蘑多糖通过STAT3和HIF-1α通路对LPS诱导的巨噬细胞发挥抗炎调节作用》

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《野生蒙古口蘑多糖通过STAT3和HIF-1α通路对LPS诱导的巨噬细胞发挥抗炎调节作用》


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取对数期RAW264.7细胞悬液接种于6孔板,接种密度为1×106个/mL,每孔2 000μL,12 h后加入LPS刺激,设置空白对照组,作用12 h后,收集细胞并提取RNA和蛋白质,RNA的提取按照北京天根生化试剂说明书进行,所提RNA通过微量分光光度计测定浓度。并用1.2 g/dL琼脂糖凝胶电泳检测RNA的质量,按照RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kits说明书进行反转录。按照Maxima SYBR Green qPCR Master Mi x说明书进行实时定量实验测定mRNA表达量,引物退火温度均为60℃,至少5个复孔,其他参照说明书,采用2-ΔΔCt法进行数据表达量分析。以GAPDH作为管家基因,NCBI中提供的mRNA成熟序列设计实时定量扩增引物。引物序列如表1。