《表1 引物序列：白藜芦醇调节氧化应激减少磨损颗粒诱导巨噬细胞肿瘤坏死因子α的表达》

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《白藜芦醇调节氧化应激减少磨损颗粒诱导巨噬细胞肿瘤坏死因子α的表达》

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刺激完成后提取各组细胞RNA，完成实时定量PCR检测:按照每10 cm2培养皿加入1 m L Tri Pure Isolation Reagent，用微量移液枪直接在培养皿上反复进行吹打，裂解细胞。将裂解液转移至1.5 mL微量离心管，室温条件下静置5 min，使核蛋白体充分分离；加入氯仿，强烈振荡15 s，室温条件下静置5 min，离心，小心吸取上层水相，转移至一新的离心管，加入异丙醇，上下颠倒混匀，室温条件下静置10 min，使总RNA充分沉淀；清洗RNA，充分干燥后，加入20μL DNase/RNase-Free水重新溶解RNA。利用Nanodrop2000测定总RNA浓度和A260/280比值，确保比值处于1.8-2.0之间；根据Transcriptor First Strand c DNA Synthesis Kit说明书的指引，进行反转录反应，得到c DNA，-20℃保存。随后采用Bio-Rad CFX96进行实时定量PCR检测，反应条件为95℃3 min（1个循环），然后95℃15 s、60℃1 min（45个循环）。反应结束后，由电脑自动分析并计算结果。以GAPDH为内参，?CT=CT（目的基因）-CT（GAPDH），??CT=?CT（样本）-?CT（Control），结果使用2-??CT法进行分析。引物序列见表1。