《表1 引物序列：幽门螺杆菌感染的胃癌和癌前病变组织中肿瘤坏死因子-α的表达及临床意义》

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《幽门螺杆菌感染的胃癌和癌前病变组织中肿瘤坏死因子-α的表达及临床意义》

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（1）实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）测定TNF-αmRNA:使用Trizol（Invitrogen公司）裂解新鲜胃黏膜组织标本，0.2 ml氯仿抽提，以12 000 r/min离心2 min，70%乙醇洗涤，焦碳酸二乙酯（DEPC）水溶解，而后使用分光光度计（Bio-Rad公司）测定TNF-α的总RNA含量和纯度。cDNA合成及PCR扩增具体步骤均参照TaKaRa试剂盒[宝生物工程（大连）有限公司]说明书进行，以GAPDH作为内参，引物序列和反应条件见表1。PCR反应条件为94℃5 min，94℃15 s，60℃40 s，40个循环。所得实验数据采用相对定量2–△△Ct法进行结果分析，比较目的基因在不同样本中的差异，每个样本均重复检测3次，取平均值。