《表1 引物序列:胃癌组织中miR-21、STAT3、FOXO3a表达及临床意义》

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《胃癌组织中miR-21、STAT3、FOXO3a表达及临床意义》


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RNA提取:取100 mg组织加入1 ml的TR-Izol试剂,将组织标本经匀浆处理,室温放置5 min。待核酸蛋白复合物完全分离后,2~8℃以10 000 r/min离心10 min,取上清。加入0.2 ml氯仿振荡15 s,室温放置3 min,2~8℃以10 000 r/min离心15 min,取无色水相层。异丙醇沉淀水相中RNA,以2~8℃以10 000 r/min离心10 min取沉淀物,75%乙醇洗涤RNA沉淀,2~8℃以7 500 r/min离心5 min,弃上清,室温放置RNA沉淀物至干燥,紫外分光光度法鉴定RNA纯度和完整性。逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR):采用反转录试剂盒将RNA逆转录为c DNA,利用实时定量PCR系统进行RT-PCR反应,行琼脂糖凝胶电泳,以β-actin和U6分别作为mRNA和miRNA的内参作为对照,紫外灯下观察结果。2-ΔΔCt法计算miR-21、FOXO3a、STAT3相对表达量。RT-PCR反应条件:95℃下30 s,95℃下15 s,72℃下15 s,共40个循环。引物序列见表1。