《表1 引物序列:锌离子抑制动脉粥样硬化进程中的巨噬细胞泡沫化》
THP-1细胞接种于30 mm培养皿中,细胞经相应处理后,除去培养液,用4℃PBS洗3次,加入1 mL Trizol试剂,冰上放置30 min,收集后,每1 mL Trizol加入0.2 mL氯仿,剧烈振荡混匀,室温静置5 min,再4℃,12 000 r/min(r=11 cm)离心15 min。小心吸取上清转移至无RNA酶的EP管中,加入等体积异丙醇,颠倒混匀,室温下静置10 min,再12 000 r/min(r=11cm)4℃离心10 min。吸去上清,用75%乙醇漂洗RNA沉淀,5 000 r/min(r=11 cm)4℃离心5 min。倒去乙醇,室温空气中干燥约10 min,随后加入20μL DEPC水溶解RNA,用核酸蛋白分析仪进行核酸定量。再根据试剂盒条件取1μg RNA进行逆转录。引物设计使用NCBI软件primer-BLAST进行设计,RT-PCR,20μL体系,反应条件:CFX96(Bio-Rad)q PCR仪,95.0℃10 min、95.0℃15 s、60.0℃1 min,39个循环;95.0℃10 s、60.0℃15 s。运用CFXmanager的2-△△t法进行相对表达量计算(表1)。
图表编号 | XD0063854300 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.05.01 |
作者 | 田甜、周芳敏、汤勇波 |
绘制单位 | 中山大学中山医学院药理学教研室、中山大学中山医学院药理学教研室、中山大学中山医学院药理学教研室 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |