《表1 各基因引物序列:大鼠矽肺纤维化进程中肺巨噬细胞IL-1β、IL-17、CTGFmRNA表达的研究》

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《大鼠矽肺纤维化进程中肺巨噬细胞IL-1β、IL-17、CTGFmRNA表达的研究》


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(1)肺组织巨噬细胞总RNA提取。用Trizol法提取大鼠肺组织巨噬细胞RNA,根据试剂盒说明对获取的巨噬细胞进行操作,同时用微量紫外分光光度计测量总RNA浓度和纯度。总RNA浓度>4μg·mL-1为符合标准;D260/280范围在1.8~2.0之间视为RNA纯度符合标准。(2)逆转录反应。使用M-MuLV第一链cDNA合成试剂盒,按说明书逆转录为c DNA。逆转录步骤:首先在42℃反应50 min,利用RNA为模板进行逆转录合成cDNA,然后70℃反应10 min终止反应。逆转录之后,将cDNA于4℃保存备用。(3)RT-qPCR反应。按试剂盒说明书,利用逆转录得到的c DNA进行RT-qPCR反应。基因引物序列见表1。