《表1 置换PCR引物信息》

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《GbTCP10基因植物表达载体的构建及拟南芥转化》

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使用带有酶切位点NcoⅠ和PmlⅠ的引物（表1），以质粒pGEM-T Easy-GbTCP10为模板进行PCR扩增，具体扩增方法参照相关说明书。利用限制性内切酶NcoⅠ和PmlⅠ对载体p CAMBIA3301和基因片段双酶切后再进行连接，双酶酶切体系如下：NcoⅠ和PmlⅠ各1μL，质粒模板10μL，10×T Buffer 5μL，补充水至50μL，37℃水浴1 h。连接体系参照相关说明书。进行菌液PCR检测，阳性单克隆送至北京华大公司测序。提取pCAMBIA3301-GbTCP10的质粒，通过冻融法和热激法转入农杆菌GV3101中，菌液PCR检测鉴定。