《表1 PCR基因引物信息》

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《舒正颗粒对2型糖尿病大鼠糖脂代谢异常PI3K/AKT信号通路的影响》

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操作步骤：（1）称取每只大鼠肝脏组织100 mg，加入1 mL Trizol裂解液，冰上充分研磨匀浆，经氯仿、体积分数75%乙醇清除杂质后提取总RNA，测定吸光度（D)（260 nm）/D(280 nm）比值，计算RNA的浓度和纯度。（2）逆转录成cDNA。按照总RNA 1μg，Oligo(dT）15 1μL，随机引物1μL，ddH2O加至12μL。继而5×逆转录Buffer 4μL，M-MuLV Reverse Transcriptase 1μL，10 mM dNTP Mix 2μL，ddH2O 1μL配制总体积为20μL的反应体系进行逆转录。（3)PCR扩增。基因的引物由美国invitrogen公司设计提供（见表1）。按照Template（cDNA）1μL、MaximaTMSYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix(2×）12.5μL、Former primer 1μL，Rear primer 1μL，dd H2O 9.5μL，总体积为25μL的扩增体系进行PCR扩增，循环条件：94℃×5 min；94℃×30 s→55℃×30 s→72℃×50 s(45个循环）；72℃×7 min。（4）采用2-△△Ct法计算各目的基因的相对表达量，计算公式为：F=2-[（待测组目的基因平均Ct值-待测组内参基因平均Ct值）-（对照组目的基因平均Ct值-对照组内参基因平均Ct值）]。