《表1 抗性基因及整合子PCR引物信息》

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《猪场废水处理系统出水及周边河流中噬菌体携带抗性基因的污染特征》

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（2）建立荧光定量PCR标准曲线：参考本团队之前研究构建的qPCR标准曲线[10]。主要步骤如下：利用抗性基因特异性引物（表1）对样品进行普通PCR，通过凝胶电泳获得特异性条带。将确认后的特异性条带进行回收纯化，构建于pMD180T载体中，并转化到DH5α感受态细胞。菌液扩繁，提取菌液质粒进行10倍稀释，获得以质粒为模板的荧光定量标准曲线。标准曲线的拷贝数（copies）=L×C/（N×M×109），其中L为阿弗加德罗常数（6.02×1023)，C是质粒DNA浓度，N为目的DNA模板长度（目的基因长度+2 992 bp)，M为每对DNA的平均分子量（660）。