《表1 PCR所用引物信息》

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《2018年福建省首例疑似狂犬病病例的病毒分离鉴定及G基因序列分析》

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注：a表示引物位点基于RABV PV疫苗株基因组序列[7]。

按柱式病毒RNA抽提纯化试剂盒说明书，分别抽提18FJ01-T1、18FJ01-T2、18FJ01-T3、18FJ01-N1样本及1.5项乳鼠脑组织病毒RNA，用逆转录试剂盒[引物为6核苷酸随机引物（N6）]将RNA反转录为cDNA。完整的G基因分为G1和G2 2个片段，以cDNA为模板，使用Premix Taq酶对G1及G2目的片段进行扩增。PCR所用引物见表1。G1段基因用引物M13FM221/M13RG781扩增得到1 096 bp的产物；G2段基因用引物M13RMSL2/M13FL2扩增得到1 531 bp的产物，测序后将G1和G2段基因拼接为完整G基因。G基因全长1 575 bp，序列位于3 316～4 890之间。PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定，同时送生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序。测序引物用通用引物M13R(5′-CAGGAAACAGCTATGACC-3′）或M13F(5′-TGTAAAAC-GACGGCCAGT-3′），引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。