《表1 试验中使用的引物序列》

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《致鸡关节炎沙门菌的分离鉴定与生物学特性研究》


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将分离菌在BHI液体培养基中37℃恒温培养24 h,按照水煮法提取DNA作为模板。根据许会会等[5]文献报道,沙门菌特异性invA靶基因引物由北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司合成(见表1),PCR扩增,各反应体系总量均为25μL,其中:Taq聚合酶预混染料(2×Taq PCR Green Mix)12μL;无菌水10μL;F-Primer 1μL;R-Primer1μL;细菌DNA模板1μL;反应条件为:94℃5 min;94℃30 s;58℃30 s;72℃30 s,35个循环;最后72℃10 min。反应结束后,取7μL扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳,缓冲液为1×TAE,140 V,160 s恒压电泳25~30 min,在EB中浸泡15 min后,用凝胶成像分析系统观察结果。