《表1 实验中使用到的引物序列》

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《青鳉gsdf调控cyp19b介导的脑垂体性腺轴性别分化》

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利用Real-time PCR法检测Cyp19b基因和Lhr基因在各基因型青鳉性腺中的表达情况。RNA使用life的Trizol法提取，c DNA合成参照M-MLV Reverse Transcriptase使用说明。分别从不同基因型青鳉性腺中提取总RNA，并使用AMV逆转录酶（Takara，大连，中国）和oligo-d T （18）引物逆转录成c DNA，用于q PCR的引物（表1；表2）。使用c DNA作为模板和SYBR Fast q PCR mix （Ta Ka Ra）进行q PCR，并用7 500实时PCR系统（applied Biosystems，CA，USA）检测以测量荧光。每个样品取3～5个样品重复，每次实验进行3个机械重复，共计3次重复实验。反应条件为：95℃预变性2 min，95℃变性15 s，58℃退火30 s，64℃延伸34 s，40个循环。使用β-actin作为内参基因，以校正实验的误差，运用2-ΔΔCt方法[ΔΔCt=（Ct目的基因-Ct内参基因）实验组-（Ct目的基因-Ct内参基因）对照组]计算目的基因的表达倍数。