《表1 该实验中使用的引物序列》

《表1 该实验中使用的引物序列》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《彩色棉查尔酮合成酶基因GhCHS1的克隆和功能分析》


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下划线:SpeⅠ和AscⅠ的酶切位点;斜体:保护碱基;Gh:陆地棉;CHS:查尔酮合成酶;UBQ7:泛素延伸蛋白;下同

利用Primer Premier Express 5.0软件设计构建病毒干涉载体的引物(V-GhCHS1-F/R)(GenBank No.LOC107897841) ,引物两端分别加上SpeⅠ和AscⅠ的酶切位点(下划线)和保护碱基(斜体);设计转基因株系鉴定的引物(A-F/R);设计目的基因GhCHS1 qPCR检测(GhCHS1 F/R)引物;设计qRT-PCR分析的内参引物(GhUBQ7 F/R)(表1) 。从NC-BI和已知棉花基因组(https://www.cottongen.org/)查找到棉花24个CHS基因序列,采用MEGA7.0软件以最大似然法进行系统发育分析,分析1 000次,提高系统发育树分支的置信水平;采用Signa IP4.1 Server(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/)预测GhCHS蛋白信号肽进行;GhCHS蛋白的亚细胞定位使用Target P 1.1(http://www.cbs.dtu.dk/services/TargetP/)和Wolf-psort(http://www.genscript.com/wolf-psort.html)工具;用SOPMA(https://npsaprabi.ibcp.fr/cgi-bin/secpred_sopma.pl)预测GhCHS蛋白二级结构;采用Swiss-model(https://swissmodel.expasy.org/)软件进行三级结构建模。