《表1 PCR引物:FBN1基因c.2418A>G突变对转录影响的研究》

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《FBN1基因c.2418A>G突变对转录影响的研究》


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以健康人和患者基因组DNA作为模板,使用高保真酶和F-EcoRI、R-HindIII扩增目的片段(包括Exon19 71 bp、Intron191040 bp、Exon20 126 bp、Intron20 511 bp和Exon2153 bp),扩增条件为98℃预变性5 min,98℃变性10 s,60℃退火5 s,68℃延伸4 min,30个循环;4℃保温。1 817 bp基因组片段(其5′端包含EcoRI酶切位点,3′端包含HindIII酶切位点)和质粒pcD-NA3.1(-)经酶切纯化后于16℃连接过夜,连接产物以热激法转化感受态细胞DH5α,经氨苄青霉素抗性筛选的单克隆菌落进行PCR和测序鉴定。相关引物序列如表1所示。