《表1 构建Atg3 gRNA相关引物序列》

《表1 构建Atg3 gRNA相关引物序列》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《自噬相关基因Atg3在埃博拉病毒组装过程中的作用研究》


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在GenBank中检索Atg3的基因序列,根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,将PAM序列(NGG)前20个碱基设定为靶向目的基因的向导RNA(guide RNA,gRNA)序列。根据候选gRNA序列的特异性,在Atg3第四外显子区域选定合适的gRNA序列(图1),人工合成两条寡核苷酸链,在正义链模板的5'端添加CAGG,反义链模板的3'端添加AAAC,以在退火之后形成与BbsⅠ酶的黏性末端互补的末端(表1)。