《表1 用于构建12份铁皮石斛SSR引物序列》

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《冠豸山铁皮石斛种质资源遗传多样性分析》

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PCR反应体系：在20对SSR引物中筛选出6扩增条带清新、对多态性好的引物（表1），引物由宝生物工程（大连）有限公司提供。PCR反应总体积为25μL，含2.0μL模板DNA，上游Primer 0.32 pmol/μL、下游Primer 0.32 pmol/μL、dNTPs 0.16 mmol/L、10×PCRBuffer 2.0μL（含Mg2+）、Taq DNA聚合酶0.04 U/μL、不足的用ddH2O补充足25μL。反应程序：在95℃条件下预变性4 min，再95℃条件下变性28 s，在温度55℃～60℃条件下退火30 s，后在温度70℃条件下延伸1 min，循环30次；70℃再延伸8 min，在4℃下保存PCR产物。产物用8%非变性PAGE电泳，非变性PAGE用硝酸银染色，染色后拍照。