《表2 SSR标记引物:182份东北地区受保护大豆品种DNA指纹库的构建及分析》

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《182份东北地区受保护大豆品种DNA指纹库的构建及分析》


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品种区分效果好、峰型易读的40对SSR引物由黑龙江省农业科学院作物育种研究所推荐(表2),荧光引物由英潍捷基(上海)贸易有限公司合成。PCR体系含1×Taq Man?Gene Expression Master Mix、30ng DNA,加dd H2O补足20μL。95℃预变性5min,94℃变性45s,60℃退火45s,72℃延伸45s~1min 30s,共32个循环;72℃延伸10~15min,16℃条件下保存。将PCR产物进行适当稀释后,取1μL稀释液加8.5μL去离子甲酰胺、0.5μL Liz-500分子量内标,于ABI 3730DNA分析仪上进行毛细管电泳检测。利用北京市农林科学院玉米中心开发的SSR指纹分析器采集扩增产物的片段大小。采用Powermarker V3.25软件进行聚类分析,用Figtree模块生成聚类图。