《表1 实时荧光定量PCR引物序列》

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《肺癌细胞来源的Sema4D通过抑制成骨细胞分化介导肺癌溶骨性骨破坏》

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Sema 4D:Semaphorin 4D；ALPL:Alkaline phosphatase，liver/bone/kidney；Col 1α1:Collagen typeⅠalpha 1；F:Forward sequence；R:Reverse sequence.

根据RNAiso Plus试剂盒说明书从4种肺癌细胞（PC9、A549、H1975和H1299）以及肺癌条件培养液诱导的成骨细胞（阴性对照组、阳性对照组、肺癌A549条件培养液组和肺癌PC9条件培养液组）中分离总RNA，以Prime Script?反转录试剂盒进行反转录，反应条件为37℃15 min、85℃5 s，4℃保存c DNA。使用SYBR?Premix EX Taq?和Applied Biosystems 7500快速定量实时PCR系统，通过实时PCR分析ALPL、Oxterix和Col1α1基因表达。实时荧光定量PCR的反应条件:95℃预变性30 s；95℃5 s，60℃退火30 s，40个循环。每个样本均设3个重复孔。以人GAPDH及小鼠β-actin作内参基因，各引物序列见表1。以2-ΔΔCt计算目的基因的相对表达水平。