《表2 CPV VP2全长基因PCR扩增引物》

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《犬细小病毒2c亚型毒株的分离与鉴定》

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在NCBI网站上下载几个CPV的VP2序列，使用DNAMAN软件进行比对。根据比对结果，选择CPV的VP2基因的保守区域使用Primer6.0软件设计一对覆盖犬细小病毒VP2基因全长的引物P1、P2（表2），通过PCR扩增获得VP2全长基因（表3）。所使用的引物为上海生工生物公司合成，扩增片段长度为1755 bp。按文献[13]方法提取待检样品、阴性对照与标准CPV的DNA，进行PCR扩增和琼脂糖电泳凝胶观察。用AXYGEN公司的凝胶回收试剂盒回收PCR产物。将回收的目的基因片段与p MD18-T载体16℃连接过夜，转化E.coli JM109，经酶切鉴定和质粒PCR鉴定后，将阳性克隆送上海生工生物公司测序。