《表1 Tk UBC2全长扩增和q RT-PCR分析引物序列》

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《橡胶草E2泛素结合酶基因TkUBC2基因的克隆及其表达分析》

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用拟南芥At UBC2（Arabidopsis thaliana，NP＿565289）的氨基酸序列对橡胶草转录组数据进行t Blastn搜索，获得橡胶草UBC2的DNA序列，参照转录组搜索获得的序列设计引物（见表1），以橡胶草品系1151叶片的c DNA为模板，用Premix TaqTM(Ex TaqTMVersion 2.0）（Takara）进行PCR扩增，反应体系：c DNA模板1μL(30 ng），2×Premix Taq Mix 10μL，正向和反向引物（10μmol·L-1）各0.5μL，dd H2O 8μL，扩增程序为95℃预变性30 s；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，共35个循环；最后72℃延伸10 min。扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳后，目的片段采用凝胶回收试剂盒（OMEGA，E.Z.N.A.TMGel Extraction Kit）进行回收，并连接到p MD-18T(Takara）载体上转化大肠杆菌DH5α进行克隆，菌落PCR检测后挑取阳性单克隆送广州艾基生物技术有限公司测序验证。