《表1 SOE-PCR扩增scFv全长序列所用引物》

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《单链抗体对Cry1A类毒素的检测方法建立及识别差异初步研究》

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以c DNA为模板，将上、下游简并引物分别等量混合进行PCR反应得到抗体重链可变区基因VH和轻链可变区基因VL，根据VH和VL基因的测序结果设计上下游引物（表1），加入限制性内切酶NcoⅠ和NotⅠ的酶切位点基因序列和连接肽互补基因序列；分别以VH和VL的重组质粒为模板进行PCR应，反应体系均为:模板DNA 5.0μL、10μmol/L正反向引物各3μL、2×Pfu MasterMix25μL，dd H2O补足50μL。NcoⅠ-VH-Linker扩增体系PCR反应条件为:94℃预变性5 min；94℃30 s，58℃30 s，72℃20 s为1个循环，进行30个循环；72℃延伸5min；最后4℃保温；Linker-VL-NotⅠ扩增体系PCR反应退火温度为67℃，其余条件与NcoⅠ-VH-Linker相同。