《表1 实时荧光定量PCR引物序列》

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《外源油菜素内酯缓解水稻穗分化期高温伤害的机理研究》

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取冷冻保存的幼穗样品0.1 g，用于蔗糖转运蛋白相关基因OsSUT1、OsSUT2、OsSUT4和细胞分裂素代谢相关基因OsLOGL2、OsLOGL3、OsCKX5、OsCKX9、OsRR2、OsRR5、ORR2和ORR4等的相对表达量测定。总RNA提取采用Trizol法[17]样品从-80℃冰箱取出后在冰上快速装入放置在液氮中的1.5 mL无NA离心管中，加1 mL TRIZOL（Aidlab Biotechnologies，北京），混匀，室温放置5 min。然后加入200μL氯仿，摇匀室温放置3 min后4℃、10 000×g下离心10 min，吸上清到1.5 mL无RNA离心管中，加入500μL异丙醇，摇匀后冰上放置10 min，4℃、10 000×g下离心10 min可出现RNA沉淀，小心倒掉上清，加1 m L 70%乙醇（DEPC水配制）4℃、10 000×g下离心10 min，小心倒掉上清后风干，加40μL DEPC水溶解RNA沉淀。RNA反转录用试剂盒[ReverTra Ace quantitative PCR RT Master Mix（Toyobo，Osaka，Japan）]进行反转录。向反转录完的20μL产物中加入140μL的双蒸水稀释，实时荧光定量PCR利用7500实时PCR系统（Applied Biosystems System）进行。基因表达分析所用引物序列如表1所示。以OsUBQ为内参基因，用2–ΔΔCT方法[18]进行标准化计算基因相对表达量。