《表1.荧光定量所采用的引物》

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《一株猪肠道Lactobacillus animalis LGM对结肠炎小鼠Th细胞分化转录因子基因表达的影响》

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待细菌培养至OD600为1时，取L.animalis LGM培养液，4°C、12000×g离心10 min，经0.22μm过滤器过滤即得L.animalis LGM培养液上清。Caco-2细胞在含10%（V/V）胎牛血清（FBS）的DMEM完全培养基中，37°C、5%CO2条件下恒温培养，待细胞在细胞培养瓶中分布率达80%–90%时传代，细胞试验在20–50代内完成。试验分为3组，对照组、细菌脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）处理组、细菌脂多糖（LPS）+10%（V/V）L.animalis LGM培养液上清处理组，每组6个重复。24孔板每孔加1 mL完全培养基，接种1×105个细胞，37°C、5%CO2条件下培养至分布率达80%–90%。更换不含FBS的DMEM培养基，静默12 h。更换新鲜培养基，除对照组外，其余2组均由LPS（2μg/mL）诱导细胞炎症，同时添加10%（V/V）L.animalis LGM培养液上清处理，37°C、5%CO2条件下培养24 h。用总RNA提取试剂盒提取处理细胞内RNA，以多功能酶标仪（Tecan，Spark，Austria）检测RNA浓度与质量，将RNA浓度调至500 ng/μL，利用反转录试剂将mRNA反转录为cDNA。Caco-2细胞内转录因子表达量采用荧光定量PCR技术检测分析，所用引物见表1，细胞活性检测依据CCK-8细胞活力检测试剂盒。