《表1 荧光定量PCR引物的碱基序列》

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《骨碎补总黄酮联合纳米骨材料促进MC3T3-E1细胞的增殖分化》

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各组干预24，48 h取MC3T3-E1细胞样品，加入Trizol试剂吹打，收集细胞置于离心管内，提取总RNA，用电泳鉴定RNA无降解及DNA污染，通过紫外分光光度计测定浓度及纯度。取反转录试剂盒进行PCR实验，提取出cDNA进行实时定量PCR，反应体系包含250 mg/L的cDNA模板2μL，SYBR GreenⅠ荧光染料10μL，上下游引物各0.5μL，双蒸水7μL，共20μL，加入定量PCR仪专用毛细管内，按如下条件进行PCR反应：95℃变性4 min，58℃30 s，72℃40 s，76℃2 s，共40个循环，同时做53-95℃范围内的熔解曲线。目的基因和内参基因β-actin表达量根据2-ΔΔCt法获得，记录实验组中各目的基因表达水平的变化。PCR引物由北京诺赛基因组研究中心有限公司合成，引物序列见表1。