《表1 棉花Bet v 1基因qRT-PCR分析的引物》

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《棉属D基因组3个野生棉种Bet v1基因鉴定及功能分析》

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经黄萎病菌处理一叶期的雷蒙德氏棉、三裂棉和瑟伯氏棉，在0 h（接种相同体积PDA培养液的对照组）、12 h和48 h分别取根、茎和叶组织样品，速冻于液氮中。使用EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒RN38（Aidlab Biotechnologies Co.，Ltd，Beijing，China）提取样品RNA，通过琼脂糖凝胶电泳和NanoDrop 2000分光光度计检测每个RNA样品的质量[23]。所有样品均取0.5μg RNA，使用TranScript-All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix（Trans Gen Biotech Inc.，Beijing，China）反转录试剂盒进行第一链cDNA合成。利用Primer Premier 5设计Bet v 1基因的特异引物（表1），以Gractin7（F:5'-ATCCTC-CGTCTA GACCTTG-3'；R:5'-TGTCCATCAGG-CAACTCAT-3'）作为内参基因进行实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative real time-polymerase chain reaction，qRT-PCR）分析，按照2-△△CT法计算基因的相对表达量。每个样品具有3个生物学重复，并进行3次技术重复。