《表1 本研究中PRSV-SD的HC-Pro突变所用引物》

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《番木瓜环斑病毒西瓜株系弱毒突变体的筛选与应用》

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Tm：熔解温度。下划线所示为引物之间的重叠序列。Tm:Melting temperature.Primer-primer overlapping sequences are underlined.

在NCBI中选取350条马铃薯Y病毒属病毒HC-Pro的氨基酸序列进行比对，发现该属病毒HC-Pro第137位（根据PRSV的HC-Pro氨基酸序列编号）天冬酰胺（N137）、第346位天冬酰胺（N346）和第417位的缬氨酸（V417）高度保守。通过定点突变技术在PRSV-SD的侵染性克隆pCamPRSV-W（产生的病毒称为野生型PRSV-SD）中引入突变，使其产生的子代病毒编码的HC-Pro中上述3个位点分别突变为丙氨酸（A），获得相应的病毒突变体。根据Liu&Naismith (2008）的方法设计突变引物（表1），所有引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，以自主构建的PRSV-SD全长侵染性cDNA克隆pCamPRSV-W为模板进行突变。