《表1 本研究中所用的引物及重组载体信息》

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《杨扇舟蛾颗粒体病毒经口侵染因子PIF0～PIF6间分子互作的酵母双杂交验证》

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上游引物（F）中包含Nde I的酶切位点CATATG，下游引物（R）中包含Pst I的酶切位点CTGCAG。Upstream primers（F）contain the cleavage site CATATG（Nde I）；downstream primers（R）contain the cleavage site CTGCAG（Pst I）.

取4层纱布过滤ClanGV侵染致死的液化虫尸，差速离心纯化多角体，采用碱裂解法提取病毒基因组并作为模板。根据NCBI注册的ClanGV基因组序列（NC＿015398），分析目的基因pif1（orf61）、pif2（orf23）、pif3（orf33）、pif4（orf74）、pif5（orf15）、pif6（orf98）的序列，利用丹麦科技大学CBS服务器上的TMHMM Server 2.0程序（http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM）进行蛋白序列的跨膜区分析。根据跨膜区的分析结果以及酵母表达载体PGADT7和PGBKT7的特点，设计相应引物进行目的基因的扩增（表1）。25μL PCR反应体系均为:2×Taq PCR Green Mix 12.5μL、DNA模板1.0μL、10μmol/L Primer F 0.5μL、10μmol/L Primer R 0.5μL、ddH2O10.5μL。扩增程序:94℃预变性3 min；94℃变性30 s，52℃（pif1、pif2、pif4扩增引物）或50℃（pif3、pif5、pif6扩增引物）退火30 s，72℃延伸（pif1、pif2、pif5扩增引物延伸2 min，pif3、pif4、pif6扩增引物延伸1 min），30个循环；72℃总延伸5 min。利用1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。