《表2 本研究所用引物：大鼠Hsp60的组织表达、分子进化及真核表达载体构建》

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《大鼠Hsp60的组织表达、分子进化及真核表达载体构建》

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注:下划线为限制性内切酶位点

以已有大鼠Hsp60基因序列（NM＿022229.2）为参考，设计扩增其全长CDS序列引物Hsp60F （加入Bam HⅠ酶切位点）和Hsp60R （加入XbaⅠ酶切位点）（表2）。以大鼠肝脏组织的c DNA为模板，用高保真DNA聚合酶PrimeSTAR扩增大鼠Hsp60的全长CDS序列，PCR反应条件：94℃预变性3 min、94℃变性30 s、60℃退火30 s、72℃延伸3 min、30个循环后72℃延伸10 min、4℃保存，产物用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测，并割胶纯化。将PCR纯化产物和pcD-NA3.1（+）质粒经限制性内切酶Bam HⅠ和XbaⅠ双酶切后构建重组子pcDNA3.1-HSP60，并转化进DH5α感受态细胞，挑取阳性菌落，经菌落PCR检测后送上海生工生物测序。按无内毒素质粒中量提取试剂盒的方法提取重组表达质粒pcDNA3.1-HSP60，按Lipofectamine3000试剂使用说明将1μg的重组质粒转染入pc-12细胞中，培养48 h后收样，Western blotting检测重组质粒表达情况。