《表1 CRISPR所用引物》

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《CRISPR/Cas9技术编辑淀粉合成基因PUL》

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根据CRISPR/Cas9的引物设计原理[17-18]，设计2个靶序列CRISPR-PUL-1和CRISPR-PUL-2（表1）。靶序列的引物退火成双链后，与线性化的SK-gRNA/AarI（20～50 ng）连接，构建成中间载体gRNA::PUL1和gR-NA::PUL2。然后，用一步法将gRNA::PUL1、gRNA::PUL2和pC1300-Cas9等3个载体同时线性化，利用同尾酶具有相同的粘性末端的特性，将三者连接成pC1300-Cas9::PUL1-PUL2。CRISPR/Cas9相关载体SK-gRNA和pC1300-Cas9等由中国水稻研究所王克剑课题组馈赠。