《表1 引物序列及来源:河南山坡土壤中三种葡萄穗霉科真菌鉴定》

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《河南山坡土壤中三种葡萄穗霉科真菌鉴定》


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基因序列扩增及测序:研究所用的基因片段为cmdA、rpb2、tef1、tub2和ITS,序列引物见表1,所用引物均由上海生工生物股份有限公司合成提供。扩增反应体系为20μL体系,包括:ddH2O 7μL,2x Taq Mix10μL,模板DNA 1μL(50~100 ngμL-1),正反向引物各1μL(10μmol L-1)。rpb2、tef1序列长度为900~1200 bp,cmdA为500 bp,扩增采用Toch-down程序:94℃30 s,94℃50 s,66℃(每个循环降低1℃)30 s,72℃延伸1.5 min,9个循环;然后94℃变性30 s,56℃退火30 s,72℃延伸1.5 min,30个循环;72℃最终延伸7 min;4℃终止。