《表2 用于qRT-PCR的标准品信息》

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《拟穴青蟹两个Crustin新变体的克隆与表达分析》

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利用Light Cycle 480ⅡPCR仪（购自Roche公司）分别进行β-actin和靶基因的实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测，并在每块96孔板设置5个已知拷贝数的标准品（表2）用以计算引物扩增效率和检测未知样品的拷贝数．PCR反应体系如下：上下游引物（同1.4节，见表1）各0.32μL，cDNA模板3.00μL，SYBR GreenⅠMaster 10.00μL，无菌水补充至20.00μL.PCR反应条件：95℃10 min；95℃30s，64℃（β-actin）/58℃（SpCrus1b、SpCrus2b）30s，72℃25s，84℃（β-actin、SpCrus2b）/81℃（SpCrus1b）荧光采集5s，40个循环．qRT-PCR反应结束后，绘制产物的溶解曲线以检测扩增特异性．