《表1 PCR引物序列：子痫前期患者血清中miR-423-5p和miR-204-5p的表达及临床意义》

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《子痫前期患者血清中miR-423-5p和miR-204-5p的表达及临床意义》

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静脉血10 mL，4℃1 600×g离心10 min，将上清液转移到另一个新的2 mL无酶离心管中，4℃16 000×g再次离心10 min，吸取上层血清转移到新的2 mL无酶离心管中，即为处理好的血清标本，于-80℃冻存备用。miRNeasy Serum/Plasma Kit（德国Qiagen公司）提取小RNA，在紫外分光光度计上测浓度，然后将浓度均调整为1μg/μL；利用miRNeasy Serum/Plasma Spike-In control（德国Qiagen公司）进行标化；利用miScriptⅡReverse Transcription Kit（德国Qiagen公司）将小RNA逆转录为cDNA；利用miScript SYBR Green PCR Kit（德国Qiagen公司）进行Real time PCR，检测血清中的miR-204-5p和miR-423-5p的表达水平。qPCR反应引物序列见表1；PCR反应条件：为预变性95℃15 min，95℃15 s，60℃30 s，70℃30 s，扩增40个循环。所有样品均做3个平行孔，循环数取其均数。每个样品目的基因的Ct用加入的外参基因线虫cel-miR-39来标化，从而校正加入的RNA量，ΔCt目的基因=Ct目的基因-Ctcel-miR-39，分别获得两组每个标本的ΔCt值，2-ΔΔCt表示目的基因相对表达水平，即miR-204-5p和miR-423-5p表达水平。