《表1 引物序列：急性缺血性脑卒中患者血清LncRNA CAI2表达水平及临床意义》

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《急性缺血性脑卒中患者血清LncRNA CAI2表达水平及临床意义》

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取AIS患者发病48 h内、对照组体检当日的静脉血3 m L，枸橼酸钠抗凝，5 000 r/min离心20 min取血清，置于-80℃液氮中保存待测。提取总RNA后，采用实时定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）法测定血清LncRNA CAI2水平，具体步骤:（1）采用High Capacity cDNA reverse transcription kit逆转录试剂盒（Applied Biosystems，USA，批号:A257414368813）将总RNA逆转录为c DNA，逆转录反应体系为20μL，包括10μL 200 ng/μL RNA、2.0μL 10×RT Buffer、0.8μL 25×dNTP Mix（100 m M）、2.0μL 10×RT随机引物、1.0μL Multi ScribeTM逆转录酶、4.2μL不含核酸酶H2O；反应条件为25℃，10 min；37℃，120 min；85℃，5 min。（2）采用PowerUpTMSYBRTMGreen Master Mix试剂（Applied Biosystems，USA，批号:A25741）对cDNA进行扩增，反应体系为10μL，包括5μL PowerUpTM SYBRTMGreen Master Mix（2×），0.5μL上游引物（500 nM）、0.5μL下游引物（500 nM）、4μL cDNA+不含核酸酶H2O。反应条件为95℃2 min，95℃15 s（40个循环），60℃30 s。采用CFX ConnectTM荧光定量PCR检测系统（BIO-RAD公司，USA）进行实时定量PCR，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）为内参，引物序列见表1。PCR扩增完成后，以GAPDH为内参，采用2-△△CT法，计数LncRNA CAI2的相对表达量。