《表1 内参基因的引物序列信息》

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《双酚A诱导下双齿围沙蚕实时荧光定量PCR内参基因的筛选》

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实验采用TBPremix Ex TaqTMII（Tli RNase H Plus）试剂盒（TaKaRa，大连）进行实时荧光定量PCR，实时荧光定量PCR反应体系共20μL，包括模板c DNA 2μL，正、反向引物（浓度为1μmol）各0.8μL，TBPremix Ex TaqTMII（Tli RNase H Plus）10μL，ROX Reference Dye II 0.4μL，ddH2O 6.0μL。反应在ABI 7500 PCR仪上进行，PCR反应包括40个循环，反应条件以Actin为例:95℃、预变性30 s，然后95℃、5 s，退火温度为60℃，30 s进行40个循环。其他内参基因的退火温度参见表1。反应结束后观察溶解曲线，发现每个内参基因产物均为单一峰值，表明产物单一，将PCR产物送去宝生物公司进行测序验证。