《表1 精液蛋白基因和内参基因的引物序列》

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《广聚萤叶甲雄虫生殖系统特异性精液蛋白基因的筛选及表达分析》

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分别取6头未交配的广聚萤叶甲4日龄雌成虫和同日龄雄成虫，分别在p H 7.4的1×PBS磷酸缓冲液中解剖获得雌成虫生殖系统（卵巢、中输卵管、侧输卵管、交配囊和受精囊）和雄成虫生殖系统（睾丸、精囊、附腺和阳茎），设3次生物学重复，液氮冷冻后于-80℃保存。利用Trizol法提取广聚萤叶甲不同性别样品的总RNA。采用超微量紫外可见分光光度计和1%琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的纯度和完整性，样本A260 nm/A280 nm在1.8～2.0之间，凝胶电泳成像中28S和18S条带清晰，无降解，且28S/18S≥1.5，可用于后续试验。取1μg样品的总RNA，参照Trans‐Script?One-Step g DNA Removal and c DNA Synthe‐sis Super Mix反转录试剂盒说明书合成第一链c D‐NA，-20℃保存备用。根据1.2.1中筛选获得的SFP基因序列，利用Primer Premier 5.0软件设计引物（表1），引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，标准曲线由2倍稀释c DNA获得。