《表2 qPCR引物序列》

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《姜黄素对宫内发育迟缓断奶仔猪肠道抗氧化功能的影响》

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注：KEAP1.Kelch样Ech相关蛋白（Kelch-like Ech-associated protein 1) ；G C L M.谷氨酸半胱氨酸连接酶（glutamate-cysteine ligase) ；TXNRD1.硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase1）。

采用qPCR检测肠道黏膜相关基因mRNA表达量。取组织样品200～300 mg，采用TRIzol试剂提取总RNA。检测所有样品RNA质量浓度和提取完整性，并用体积分数0.1%的焦碳酸二乙酯将各样品RNA质量浓度调整至500 ng/m L。采用相同质量浓度的总RNA样品按照反转录试剂盒说明书，加入总RNA 2.0μL、20×RT Enzyme Mix 4.0μL、Nuclease-free H2O 14.0μL，按照下列条件进行反转录反应：37℃，15 min；85℃，5 s；4℃保存。反应结束后所得的cDNA原液用超纯水按体积比1∶4稀释。按照SYBR?Premix Ex Taq?定量试剂盒说明书进行操作，依次往qPCR管中加入以下试剂（20μL体系）：cDNA 2μL、SYBR Premix Ex Taq 10μL、上游引物0.4μL、下游引物0.4μL、ROX Reference Dye 0.4μL、超纯水6.8μL，混匀离心后在qPCR仪上反应检测。反应程序如下：95℃、0 min；95℃、15 s，60℃、45 s，重复40个循环。选择β-actin作为内参基因，利用2-??Ct法对目的基因mRNA表达进行相对定量。各目的基因引物序列见表2。