《表1 光倒刺鲃mc5r基因克隆和表达分析的引物》

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《光倒刺鲃mc5r基因的克隆及对饥饿的响应》

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取25 mg光倒刺鲃肌肉组织，使用生物工程（上海）股份有限公司（简称生工）的Ezup柱式DNA试剂盒提取DNA，使用Prep柱式DNA胶回收试剂盒回收DNA。根据金线鲃（Sinocyclocheilus grahami）的编码区序列设计引物F1和R1（表1），以光倒刺鲃基因组DNA为模板进行扩增，根据扩增出的光倒刺鲃mc5r中间序列片段，正向和反向各设计3条特异性染色体步移引物，分别为F2、F3、F4、R2、R3和R4，与Genome Walking Kit（TaKaRa）试剂盒提供的兼并引物进行热不对称PCR反应，反应步骤和反应条件按试剂盒说明书进行操作，送生工测序，得到正向和反向序列片段。