《表1 验证DNAI1和DNAH5基因突变的引物》

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《内脏异位综合征患儿中DNAI1和DNAH5基因编码区突变分析》

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采集HTX组和对照组儿童的外周静脉血2 mL。用QIAamp DNA Blood Mini Kit (Qiagen，Hilden，Germany）试剂盒提取基因组DNA，NanoDrop分光光度计分析DNA的纯度和浓度。所有样本皆储存于-80℃冰箱备用。抽提的DNA送上海伯豪生物技术有限公司进行外显子测序，采用Agilent SureSelect All Exon V 6人全外显子捕获系统和Illumina测序平台进行高通量测序。选择外显子组测序检测发现的突变发生频率在对照组<0.001的DNAI 1和DNAH 5突变位点进行PCR扩增验证。应用Primer5设计相应位点的特异性引物（表1），以HTX患儿基因组DNA为模板进行PCR扩增。PCR扩增产物由华大基因科技有限公司进行Sanger测序验证。应用生物信息学软件MutationTaster (http://www.mutationtaster.org/）、SIFT (http://sift.jcvc.org/www/SIFT＿enst＿submit.html）和Polyphen-2 (http://genetics.bwh.havard.edu/pph 2/）进行突变蛋白的功能预测。应用ClustalX进行突变位点的保守性分析，探究突变位点在内脏异位发病过程中的作用。