《表1 qPCR引物设计》

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《海带中岩藻黄素异构体的分离纯化及其体外抗肿瘤活性研究》

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MDA-MB-231细胞加入80μg/mL岩藻黄素异构体后孵育48 h。使用总RNA提取试剂盒进行细胞总RNA提取，提取的RNA浓度和纯度通过NanoDrop进行检测，其260/280值均在2︰1左右。取100 ng左右RNA反转录成c DNA，反转录体系为:总RNA5μL，Oligo（dT）1μL，Reaction Mix 10μL，Enzyme Mix1μL，gDNA Remover 1μL，Rnase-free Water 2μL。PCR程序为:42℃孵育15 min，85℃孵育5 s。通过qPCR检测相关基因表达水平。qPCR反应体系为:模板6.8μL，引物各0.4μL，qPCR SuperMix 10μL，校正液0.4μL，Nuclease-free Water 2μL。qPCR程序为:94℃孵育30 s，94℃孵育5 s和60℃孵育30 s循环，循环次数为45次。各基因表达量以GAPDH基因的表达量作参照，每组3个复孔。其引物设计见表1。