《表1 qRT-PCR验证实验中选取的miRNAs引物序列》

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《白羊草叶片和根系干旱胁迫下microRNAs差异表达分析》

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为了对miRNAs测序数据进行验证，我们采用qRT-PCR法对随机选取的8个miRNAs表达量进行测定。首先设计特异性的反转录引物RT primer（reverse transcription primer）（表1） ，然后以建库所剩的总RNA为模板，按照说明书的指导使用M-MuLV Reverse Transcription进行cDNA的合成。然后使用每个miRNA特异性的正向引物和通用的反向引物（表1）进行PCR扩增，qRT-PCR的反应体系为:总体积为20μl，包括2μl的cDNA，0.8μl引物混合物，10μl的1×SYBR Mix。反应程序为两步法:第一步95℃3min，第二步95℃5s，60℃20s，40个循环。每个样品3个重复，内参基因为18s rRNA[14]，基因的相对表达量使用2-ΔΔCt法进行[24]。