《表1 引物序列：口腔黏膜组织中miRNA-590对口腔扁平苔癣癌变的早期诊断效果》

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《口腔黏膜组织中miRNA-590对口腔扁平苔癣癌变的早期诊断效果》

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2.研究方法:采用实时荧光定量PCR技术检测三组受试者口腔黏膜组织中miRNA-590的表达水平。RIzol试剂（Invitrogen，美国）依据说明书提取口腔黏膜组织标本总RNA，用紫外分光光度仪测定总RNA浓度与纯度，0D260/0D280在1.8～2.0，琼脂糖凝胶电泳检测质量。采用One Step PrimeScript miRNA-590 cDNA Synthesis kit（Takara.日本）进行反转录反应[5]。取组织总RNA各lμl，miRNA-590-590 PrimeScript反转录酶混合物2μl，miRNA-590反应缓冲液10μl，加无RNA酶水至反应体积为20μl，37℃60 min，95℃5 min终止反应。用mi Script SYBR Green PCR Kit（Qiagen，德国）在ABI 7500PCR仪上进行荧光实时定量PCR检测miR-590表达情况。荧光实时定量PCR反应miR-590及内参U6上游引物由上海生工公司合成，各基因引物序列如表1所示。将引物分别用超纯水溶解后，制成10pmol/μl溶液，取出2.0μl加至PCR体系中，行PCR反应。将扩增后PCR产物立即进行电泳，最终计算出基因表达量。