《表1 DAPK MSP扩增引物序列》

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《子宫内膜癌中死亡相关蛋白基酶甲基化、Ki67表达水平与临床病理参数的关系》

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采用酚氯仿法提取各组子宫内膜组织DNA，利用美国Bio-Rad公司核酸蛋白测定仪检测所提DNA浓度后，于-20℃保存DNA。利用德国Qiagen公司Epitect Bisulfite试剂盒进行DNA亚硫酸盐修饰及DNA纯化操作，具体操作严格按照试剂盒使用说明进行。利用甲基化特异性聚合酶链式反应（MSP）检测DAPK甲基化水平。引物由上海生工合成，具体见表1。反应总体积25μl:DNA 5.0μl，10×PCR Buffer 2.5μl，dNTP（2.5mmol/L）1.0μl，MgCl2（25 mmol/L）2.0μl，引物1.0μl，RNase H2O 12.5μl。PCR反应条件为:95℃预变性15 min，94℃2 min，60℃2 min，72℃2min，进行30个循环，94℃30 s，58℃45 s，72℃30 s，进行40个循环，72℃延伸3 min。