《表1 qPCR及MSP引物序列》

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《乳癌组织miRNA-429基因表达及甲基化检测》

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MSP Handbook试剂盒说明书检测癌组织及癌旁组织miR-429基因启动子区甲基化水平。甲基化和非甲基化引物序列见表1。甲基化扩增体系的反应条件:95℃预变性10 min；94℃15s，52℃30s，72℃30s，共进行40个循环；最后72℃延伸10 min。非甲基化扩增体系的退火温度提升至56℃，其他步骤均与甲基化扩增体系相同。扩增产物置于20g/L的琼脂糖凝胶中电泳，紫外线光照射显带。miR-429基因启动子区MSP产物在电泳后显示为甲基化条带（167bp，M带）和非甲基化条带（169bp，U带）。扩增出M带，有或无U带者为甲基化阳性；扩增出U带而无M带者为甲基化阴性。甲基化阳性率=甲基化阳性标本数/总标本数×100%。