《表2 PCR引物序列及产物长度》

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《Genistein对大鼠卵巢颗粒细胞CREB基因表达的影响》

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注:CREB:c AMP反应元件结合蛋白；PCR:聚合酶链反应

利用RT-PCR技术检测CREB mRNA表达。先使用Trizol提取细胞总的RNA，按PCR试剂盒说明书逆转录。利用Gene Runner软件进行设计引物，β-actin作为内参。PCR反应的扩增条件为94℃预变性1 min，94℃变性4 min，58℃退火1 min，72℃延伸1 min，循环次数为38次，72℃充分延伸10 min。扩增产物以1.5%琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像系统拍照并进行条带灰度分析，以目标基因CREB与内参β-actin灰度的比值代表CREB的相对表达量。实验重复3次。CREB及β-actin的引物序列及产物长度见表2。