《表1 PCR实验中的引物序列及产物片段长度》

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《不同环境条件下Pseudomonas sp.脱氮特性及功能基因表达差异研究》

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注:*用于Q-PCR实验的引物.

为进一步探究不同环境条件对菌株脱氮特性影响的机理，Q-PCR技术测定菌株脱氮相关的功能基因（amo A，nap A，nirS，cnor B和nos Z）在不同环境条件下的表达量.采用RNAprep pure Cell/Bacteria Kit（天根生化，北京）对菌株总RNA进行提取.以提取的RNA为模板，用PrimeScript?RT reagent Kit（Ta Ka Ra，日本）反转录合成互补DNA.各功能基因的引物序列参照菌株全基因组序列进行设计，引物序列如表1所示.菌株的16S rDNA作为内参基因来校正不同样品中c DNA含量的差异.将各样品的c DNA样品进行梯度稀释，并分别绘制各功能基因和内参基因的标准曲线.同时用SYBR GreenΙ法对各样品的目标基因及内参基因进行Q-PCR检测.PCR反应程序:95℃预变性10min；之后进入40个循环，包括95℃下变性5s，60℃退火40s收集荧光，72℃下延伸30s；循环结束后72℃下延伸10min.每个样本检测3个复孔，数据采用2-ΔΔCT法进行分析.